淺談如何制作優(yōu)質(zhì)的薄層液基細(xì)胞制片——生物論文

一、制片材料與方法

1.1 制片材料

    制片材料主要有：毛刷、保存瓶、玻片、離心管、離心機(jī)、細(xì)胞粘附劑、、染色架、染色

槽、100%酒精、PBS 緩沖液、蘇木素染液、EA/OG 染液、二甲苯、蓋玻片、中性樹(shù)膠[1]。

1.2 制片方法

第一，用毛刷插入宮頸管，并抵住宮頸外口，順時(shí)針?lè)较蜣D(zhuǎn)圈3至5圈，然后取出刷頭放入細(xì)胞保存液中。

第二，收集標(biāo)本并振蕩標(biāo)本瓶，然后用細(xì)胞粘附劑涂勻玻璃片，并置于37度的恒溫箱中進(jìn)行干燥。

第三，取適當(dāng)?shù)谋４嬉壕鶆蚍街糜谂c離心管內(nèi)，并確保編號(hào)一致。

第四，將離心過(guò)后的上清液導(dǎo)入對(duì)應(yīng)編號(hào)的保存液中，然后充分振蕩以保證離心管內(nèi)的細(xì)胞均勻。

第五，用吸管吸取適量的稀釋后的保存液，然后將其放置于模具中，并開(kāi)始甩片。

第六，甩片完成后，取出玻片并置于95%酒精中進(jìn)行固定，固定時(shí)間約為十分鐘。

第七，用快速巴氏染色劑對(duì)50張玻片進(jìn)行染色。

第八，從固定液中取出玻片，并放置于玻片板上進(jìn)行吹干，然后采用中性樹(shù)膠對(duì)其進(jìn)行干封。

二、結(jié)果

    對(duì)已制作完成的50例薄層液基細(xì)胞制片進(jìn)行分析后，薄層液基細(xì)胞制片顏色清晰、 厚度均勻、無(wú)非特異性染色裝，這有效提高了醫(yī)生工作效率。

三、討論

a，采集方法

    收集醫(yī)院就診患者的液基細(xì)胞，將其放入保存液中，并保證保存瓶是干凈的以及保存瓶的編號(hào)一致，以防液基細(xì)胞與保存液不一致，進(jìn)而影響醫(yī)生診斷。

b，保存液固定

    完成甩片后，醫(yī)生應(yīng)將模具打開(kāi)，并取出專用的玻片，然后將其放置于95%酒精內(nèi)進(jìn)行固定，其中，固定時(shí)間約為十分鐘。在此過(guò)程中，醫(yī)生應(yīng)拆下一次性的過(guò)濾膜，并放置于專用的醫(yī)療垃圾同種，并用流動(dòng)水清洗玻璃模具[3]。

c，制片過(guò)程和注意事項(xiàng)

    制作優(yōu)質(zhì)的薄層液基細(xì)胞制片的過(guò)程主要有：一，振蕩，按編號(hào)將標(biāo)本瓶放在振蕩器上。振蕩時(shí)間宜一分鐘左右，這有利于保存液中的細(xì)胞均勻。二，離心，取適當(dāng)?shù)谋４嬉壕鶆蚍街糜谂c離心管內(nèi)，并確保編號(hào)一致。三，稀釋，將離心過(guò)后的上清液導(dǎo)入對(duì)應(yīng)編號(hào)的保存液中，然后充分振蕩以保證離心管內(nèi)的細(xì)胞均勻。在稀釋液體時(shí)，應(yīng)該按照細(xì)胞量的多少進(jìn)行稀釋，并將稀釋后的液體存放與保存液中[4]。在稀釋過(guò)程，醫(yī)生應(yīng)注意細(xì)胞不可過(guò)多，過(guò)量的細(xì)胞容易導(dǎo)致涂片過(guò)厚，進(jìn)而影響境下診斷。四，甩片，用吸管吸取適量的稀釋后的保存液，然后將其放置于模具中，并開(kāi)始甩片。甩片一般設(shè)置為1300轉(zhuǎn)，制作時(shí)間大約為2至4分鐘。五，固定，甩片完成后，取出玻片并置于95%酒精中進(jìn)行固定，固定時(shí)間約為十分鐘。六，染色，用快速巴氏染色劑對(duì)50張玻片進(jìn)行染色[5]。七，封片，從固定液中取出玻片，并放置于玻片板上進(jìn)行吹干，然后采用中性樹(shù)膠對(duì)其進(jìn)行干封。

d，制片后95%酒精固定

    完成保存液甩片后，取出適量的玻片并置于95%酒精中進(jìn)行固定，固定時(shí)間約為十分鐘。在固定的過(guò)程中，醫(yī)生應(yīng)拆下一次性的過(guò)濾膜，并放置于專用的醫(yī)療垃圾同種，并用流動(dòng)水清洗玻璃模具。

e，H-E染色，封片

    在具體染色過(guò)程中，核染液宜染色一分鐘左右，流動(dòng)水沖洗時(shí)間為1分鐘左右，其中漿染液宜染色一分鐘左右，添加增色液的時(shí)間約為10分鐘，最后，固定液宜采用100%的酒精，時(shí)間為2分鐘左右[6]。

    從固定液中取出玻片，并放置于玻片板上進(jìn)行吹干，然后采用中性樹(shù)膠對(duì)其進(jìn)行干封。在封片的過(guò)程中，醫(yī)生應(yīng)注意玻片質(zhì)量，并保證玻片表面的清潔[7]。封片完成后，確保無(wú)氣泡和樹(shù)膠滲出。一旦有氣泡和樹(shù)膠滲出，這將影響醫(yī)生的診斷。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 曹婉維，王曉鴻，鄭燕璇.制作優(yōu)質(zhì) LCT 液基細(xì)胞片的方法與探討[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011，6（21）:46.

[2] 張西海.薄層液基細(xì)胞在宮頸病變中的應(yīng)用[J].黔南民族醫(yī)專學(xué)報(bào)，2012，25（1）:21.

[3] 陶玉，何松，吉志固.液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在非婦科標(biāo)本中的應(yīng)用體會(huì)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2009，25（5）:559.

[4] 曹婉維，王曉鴻，鄭燕璇.制作優(yōu)質(zhì) LCT 液基細(xì)胞片的方法與探討[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011，6（21）:46.

[5] 宋麗君，魏波，李英勇.薄層液基細(xì)胞學(xué)篩查宮頸病變及 HPV感染的價(jià)值[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（1）:122.

[6] 龍志賢，劉?？?薄層液基細(xì)胞篩查宮頸病變的臨床價(jià)值[J].中外醫(yī)療，2009，6（16）:8.

[7]歐陵斌，楊曉斌，柏彬，魯君艷，朱宏健.4種液基細(xì)胞制片的比較[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2013，29（4）：457.