外周血淋巴細胞篩選敏感抗腫瘤藥物臨床應(yīng)用的可行性研究

    有效治療腫瘤是醫(yī)學上一個重要的課題，通常醫(yī)學上對于治療腫瘤患者采用化療的方法，化療能對腫瘤細胞的擴散具有一定的抑制作用，但是多次化療后，對于腫瘤擴散的抑制作用就比較小了。這是因為患者身體內(nèi)的腫瘤細胞對于化療藥物產(chǎn)生了一種耐藥性。耐藥性是病變體對化療藥物產(chǎn)生的一種耐受性，會降低藥物的療效。醫(yī)學上會尋找一些和腫瘤細胞具有相似性的細胞進行抗腫瘤藥物的篩選，外周血淋巴細胞是一種和腫瘤細胞具有很大相似性的細胞，因此醫(yī)學上會使用外周血淋巴細胞進行敏感性試驗。文章對外周血淋巴細胞對抗腫瘤藥物的敏感進行研究，報告如下。

一、資料和方法

1.1臨床資料

    選取我醫(yī)院在2011年7月~2012年1月的40例確診的腫瘤細胞患者，其中男性患者有25例，女性患者有15例，所有患者中年齡最低為55歲，最高為78歲，平均年齡在69±9.7歲。在這40例患者中，有大腸癌11例，胃癌11例，食管癌9例，膀胱癌7例，肺癌2例。所有患者此前均未進行過化療治療。

1.2準備藥物

    此次實驗需要準備的抗腫瘤藥物有8種，分別為表阿霉素、卡鉑、順鉑、威猛、長春新堿、環(huán)磷酰胺、蓋諾、氨甲喋呤[1]。對這些藥物進行調(diào)配，其中表阿霉素800g/ml、卡鉑400g/ml、順鉑800g/ml、威猛80g/ml、長春新堿10g/ml、環(huán)磷酰胺500g/ml、蓋諾60g/ml、氨甲喋呤400g/ml。

1.3準備試劑和器材

    準備好需要用到的試劑和器材，試劑有胰蛋白酶、青霉素、淋巴細胞分離液、MTT、鏈霉素、血清、二甲基亞砜。器材有酶聯(lián)免疫檢測儀、顯微鏡、CO2孵箱。

1.4研究方法

    先將外周血通過淋巴細胞分離液分離出外周血淋巴細胞，再將患者體內(nèi)的腫瘤細胞進行分離，用生理鹽水對腫瘤組織進行清洗好后放入胰蛋白酶進行消化，制成單細胞懸液。將細胞數(shù)調(diào)整為適合孔板的數(shù)目。這樣就制成了外周血淋巴細胞懸液和腫瘤細胞懸液。將細胞懸液分成ABC三組，A組為淋巴細胞懸液、抗癌藥物、培養(yǎng)液調(diào)配液，分別為100L/孔、10L/孔、90L/孔；B組為淋巴細胞懸液和培養(yǎng)液的調(diào)配液，均為100L/孔；C組為單純的培養(yǎng)液200L/孔。這三組調(diào)配液存放的孔板要加入CO2孵箱，在37.5℃的環(huán)境下培養(yǎng)48小時，并使用顯微鏡觀察細胞培養(yǎng)的動態(tài)。最好要用MTT進行檢測，對外周血淋巴細胞對抗腫瘤藥物的敏感性進行計算。

1.5細胞抑制率的計算

    對細胞培養(yǎng)液去掉上清后，用二甲基亞砜停止反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測OD值。

細胞抑制率=（1-加藥組平均OD值/對照組平均OD值）×100%[2]。

1.6評判標準

    如果細胞抑制率≥50%則為具有高敏感性，30%~50%則為敏感，＜30%則為不敏感，即具有抗藥性。

1.7統(tǒng)計學分析

    將所有數(shù)據(jù)進行收集，并采用SPSS13進行處理。數(shù)據(jù)的相關(guān)性分析則采用直線相關(guān)分析研究。

二、結(jié)果

    經(jīng)過實驗可知，在這8種抗腫瘤藥物中，表阿霉素、威猛、蓋諾和環(huán)磷酰胺這4種抗腫瘤藥物對患者的腫瘤細胞抑制率和對外周血淋巴細胞的抑制率具有正相關(guān)的關(guān)系，兩者的相關(guān)性明顯，細胞抑制率分別為0.563、0.685、0.324、0.528；氨甲喋呤、順鉑、長春新堿和卡鉑這4種抗腫瘤藥物對患者的腫瘤細胞抑制率和對外周血淋巴細胞的抑制率關(guān)系不明顯，細胞抑制率分別為0.121、0.258、0.176、0.068。

三、討論

    從實驗可知，外周血淋巴細胞進行篩選敏感抗腫瘤藥物具有一定的可行性。

    在腫瘤和癌癥的治療中，通常會使用化療手段進行治療，化療能對腫瘤細胞的擴散具有一定的抑制作用，但是常常會發(fā)生患者進行多次化療后，化療對于腫瘤擴散的抑制作用越來越小的情況。這是由于患者身體內(nèi)的腫瘤細胞對于化療藥物產(chǎn)生了一種耐藥性。而耐藥性就是體內(nèi)病變體對化療藥物產(chǎn)生的一種耐受性，它會降低藥物的療效。醫(yī)學上會采用和腫瘤細胞具有相似特性的身體細胞進行對抗腫瘤藥物敏感性的測試，以便篩選更具有療效的抗腫瘤藥物進行治療，外周血淋巴細胞就是醫(yī)學上用來進行敏感抗腫瘤藥物的篩選。

    外周血淋巴細胞對不同的抗腫瘤藥物具有不同的敏感性，但無法對所有的抗腫瘤藥物具有很強的敏感性，因此外周血淋巴細胞通常在很難獲取腫瘤細胞的情況下可以代替腫瘤細胞對藥物的敏感性進行測試，間接來估計腫瘤細胞對藥物的敏感性。

    MTT是醫(yī)學上用來對細胞的生長情況進行檢測的一種方法，它主要是通過活細胞中的酶還原出晶體沉積在細胞中，并用酶聯(lián)免疫檢測儀來檢測光吸收值。晶體的數(shù)量能夠間接反映活細胞的數(shù)量。它具有方便高效、經(jīng)濟實惠的優(yōu)點，因此在醫(yī)學上廣泛使用。

    綜上所述，外周血淋巴細胞對于篩選敏感抗腫瘤藥物雖然不完全有效，但具有一定的參考價值。目前的醫(yī)學還未發(fā)現(xiàn)可以完全替代腫瘤細胞進行對抗腫瘤藥物進行敏感性檢測的人體細胞，因此外周血淋巴細胞對于醫(yī)學上篩選敏感抗腫瘤藥物臨床應(yīng)用具有很大的作用和意義。

【參考文獻】

[1]朱仲麗. 人外周血淋巴細胞亞群抗腫瘤效應(yīng)的研究[D].泰山醫(yī)學院,2012. 

[2]劉晶,魏文青,張艷,楊夢迪,趙滿倉. 腫瘤患者外周血淋巴細胞和腫瘤組織對化療藥物敏感性的比較[J]. 中國誤診學雜志,2011（02）:258-260.